规格介绍
一、兔多克隆抗体制备服务
1、服务要求:目前我们暂不提供抗原制备服务,客户需自己提供抗原。我们对抗原的要求如下:1)3-5mg蛋白,纯度在85%以上;2)样品溶解于pH偏中性的缓冲液,最好为PBS。如含有尿素,去污剂或有机试剂等请事先告之;3)浓度不低于0.2mg/ml。
2、制备方法:我们用两只健康新西兰大白兔进行抗体制备实验,免疫4次,保证效价在1:32000以上(P/N≥2.1)。实验周期为90天。具体实验过程请参见下表:
时间(天) | 实验内容 | 具体说明 |
0-7 |
1)抗原检测 2)阴性血清采集 |
1)SDS-PAGE检测抗原纯度;2)抗原浓度检测;3)制备1.5ml免疫前血清 |
8 | 第1次免疫 | 抗原与弗氏完全佐剂乳化,多点注射 |
29 | 第2次免疫 | 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射 |
36 | 取血样1 | 耳缘静脉取血2ml,制备1ml血清 |
50 | 第3次免疫 | 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射 |
57 | 取血样2 | 耳动脉或心脏采血10ml,制备5ml血清 |
71 | 第4次免疫 | 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射 |
81 | 颈动脉放血 | 每只兔子可得到60ml左右的血清。 |
82-88 | 血清效价检测 | 用间接ELISA测定2-4免血清效价 |
89 | 快递交货 | 1)100ml血清;2)效价检测报告 |
3、交货内容
1)1ml免疫前血清;2)100ml-150ml免疫血清,效价大于1:32000;3)效价检测报告:2-4免血清的间接ELISA结果。
备注:我们提供抗体纯化服务,但需要客户额外支付费用。
二、单克隆抗体
1、服务要求:目前我们暂不提供抗原制备服务,客户需自己提供抗原。我们对抗原的要求如下:1)1-3mg纯化蛋白,纯度在85%以上;2)样品溶解于pH偏中性冲液,最好为PBS。如含有尿素,去污剂或有机试剂等请事先告之;3)浓度不低于0.2mg/ml。
2、制备方法:我们免疫4只Balb/c小鼠,通过细胞融合与筛选制备单克隆抗体。实验周期为150天。具体实验过程请参见下表:
时间(天) | 实验内容 | 具体说明 |
0-7 | 1)抗原检测 | 1)SDS-PAGE检测抗原纯度;2)抗原浓度检测; |
8 | 第1次免疫 | 抗原与弗氏完全佐剂乳化,多点注射 |
29 | 第2次免疫 | 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射 |
50 | 第3次免疫 | 抗原与弗氏不完全佐剂乳化,多点注射 |
57 | 取血样 | 眼眶取血100-200ul,用于免疫效果检测 |
71 | 加强免疫 | 抗原不加佐剂,剂量加倍,腹腔注射 |
74 | 细胞融合 | 用PEG1450将脾细胞与SP2/0细胞融合 |
84 | 检测与克隆1 | 细胞培养 |
94 | 检测与克隆2 | 细胞培养 |
104 | 检测与克隆3 | 克隆一般进行3次,直到阳性率达到100%为止 |
105-114 | 检测与扩大培养 | 用于注射小鼠制备腹水与细胞株的冻存 |
115-120 | 注射腹水 | 等待腹水长出 |
121-140 | 采集腹水 | 完成腹水采集 |
141-147 | 腹水纯化与检测 | 采用辛酸-硫酸铵法纯化腹水 |
148-150 | 交货 | 1)实验记录;2)两株单克隆的杂交瘤细胞;3)两株单抗的纯化腹水各5ml。 |
1)实验记录;
2)两株单克隆的杂交瘤细胞;
3)两株单抗对应的纯化腹水各5ml。