目前生化试剂种类繁多,如何正确合理的使用,充分提高检验结果的准确性,以便更好的为临床诊断服务。

 

1、优质的仪器用水

    优质的仪器用水是使用好检验试剂的一个十分重要环节之一。因为测定离子类的项目:比如铜、铁、锌、钙、Mg、磷。这些项目在使用过程中,仪器用水的质量相当重要,虽然现在一般医院的生化仪都带有制水系统,但制水系统基本都是制备去离子水,离子交换树脂在使用一段时间后交换能力明显下降,需要定期进行更换,否则制备的水离子含量多,电导率偏高。使用含离子超标的水冲洗仪器,直接影响检验结果。再如血氨、二氧化碳项目,如果水质不好,仪器用水中本身含氨和二氧化碳就很高,则检测该项目的结果也会受到严重的影响。还有如果血清中含有GLDH,而仪器用水存在氨时,可消耗NADH,使利用NADH的酶联连续监测法结果偏高。解决办法:定期监测水质,当仪器用水的电阻小于1.0MQ时要更换离子交换树脂或活性炭。

 

2、标本的及时分离及测定

    标本的及时分离及测定是用好检验试剂的首要环节因为凡是利用NADH转化为NAD+变化率来检测其物质含量的试验都或多或少受到血液存放时间的影响。原因是全血存放时间越长,红细胞利用血清中的糖进行无氧酵解产生丙酮酸,丙酮酸使NADH转化为NAD+,这样使测定结果假性升高。解决办法:①作好与临床的沟通,对抽血人员和标本运送人员(传递人员)进行培训;②及时分离血清并及时检测;③也可将全自动生化分析仪上的延迟时间设置大于60秒,这样试剂在延迟期内消除丙酮酸的干扰,可完全避免假阳性结果的出现。

 

3、交叉污染

    3.1生化分析仪本身的清洗问题造成的交叉污染在使用全自动生化分析仪时,仪器的交叉污染现象是引起实验结果偏离的一个原因。由于全自动生化分析仪试剂针需要接触各种试剂,一般难以彻底清洗干净,所以容易造成分析项目的携带污染.而生化项目的测定往往仅需要几微升样本,试剂往往需要几百微升,尤其在没有自动冲洗程序的流动池式生化分析仪上,由于前带现象的存在,如果前一个样本为高值样本,则接后的第一个低值标本结果应慎重报告。不仅没有冲洗程序的生化分析仪器上有这种现象,就是具有自动冲洗程序的全自动生化分析仪也有交叉污染,例如Beckman全自动生化分析仪CX4,它的试剂吸针(Probe)、样品吸针及反应搅拌棒是利用高压冲洗液冲洗,然后用高压压缩空气吹干,有时由于洗液压力和压缩空气的压力偏低,使试剂吸针、样品吸针及反应混匀棒冲不干净、吹不干,从而导致反应池之间相互污染、试剂间交叉污染,使检验结果偏离。另一个值得注意的问题是许多生化仪器由于长期频繁的利用,使加样针和试剂针的注射器磨损加重或注射器的"特氟龙"吸头不及时更换,使吸样针或试剂针密封层增大,产生泄漏现象也是造成样本间及试剂间相互污染的一个重要原因。试剂吸样或样品吸样不准确,通常导致利用速率法测试的标本系统偏低或偏高。众所周知,速率法计算因子是由加样体积和试剂体积参与确定的,如果加样体积或加试剂体积不准,导致真正速率计算因子和理论计算因子偏离,从而使检测结果不准确。解决办法:①定期进行仪器维护保养;②按要求及时更换零部件;③定期对仪器进行校准;④全自动生化分析标本和试剂用量少,残存少量即会影响测试结果,每天应用无水乙醇擦洗并定期更换干燥棒,保证比色杯清洗后不留残液,避免比色杯的交叉污染。

    3.2检验项目间的交叉污染在全自动生化分析仪的使用中,我们发现一个项目会影响紧随其后项目的测试结果,造成这种影响的原因之一是一种试剂中含有另一试验的测定物质而直接干扰其测试结果。原因之二是一种试剂中含有改变另一试验反应条件或影响其反应进程的物质而间接干扰其测试结果。比如:在TP试剂中含有大量的CuSO4,如果将Cu放在TP项目的后面检测,会使检测结果偏高或重复性差。再如P放在含有磷酸盐的项目后面,TBA放在含有胆酸盐的项目后面都会使检测结果偏高或重复性差。GLU放在CK和CK-MB的项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。LDH放在ALT和AST的项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。Mg放在ALP等含有镁离子项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。Ca放在a-Amy项目后面可能会使检测结果偏高或重复性差。Mg试剂(CALMAGITE法)中含有EGTA,会干扰Ca的测定结果。另外我们发现相邻两个项目的PH值相差太大或反应对PH要求严格的项目,也会对测定的结果产生影响,比如TP和Alb之间PH相差较大,会互相干扰,TBA放在Alb后面测定,会使测定结果偏低等等。解决办法:①调整实验的前后顺序来消除这种影响;②在造成污染的项目和受污染的项目之间设置清洗剂并设定进行清洗的次数。　　

4、正确的参数设置也是用好检验试剂的一个关键因素

    现代化分析仪上通常有分析程序供用户设定,包括样品量、试剂量、波长、分析方式和延迟时间、测试时间的设定等。下面我们就延迟时间和加样程序的设定来说明正确使用分析参数对于正确运用试剂的作用。比如肌酐苦味酸测定法,我们在设定延迟时间时应注意到苦味酸在碱性条件下50秒前首先快速与如乙酰乙酸等快反应物质产生红色化合物,而在120秒后碱性苦味酸又能与慢反应物质产生阳性干扰,解决办法:最好设定延迟时间为50~60秒之间,测定时间小于60秒,这样就充分消除了快反应和慢反应干扰,从而检测到真正肌酐含量。

 

5、校准液的正确使用

    由于目前生产厂家提供的校准液并非通用的,只适用于某一特定的分析系统。同一项目不同方法学之间有很大差异,同一项目不同方法学的校准液更不能混用,但是在临床检验中经常会发生胆红素钒酸盐法用重氮法的校准液校准,乳酸脱氢酶L-P法用P-L法校准液校准。TBA循环酶法用比色法校准液校准等都会造成测定结果不准确。另外同一方法学,不同厂家的校准品和试剂都会有所差异。解决办法:①建议结合各实验室条件选择适合自已实验室的校准品,如有条件可进行系统溯源;②建立满足在同一方法学、同一测定条件、与理论计算的factor值差异不大,没有发现有明显影响因素,方可进行校正测定;③建立一个可靠的参考系统作为准确性基础,然后将准确性转移到"使用方法"测定中去,使"使用方法"测定结果可溯源到参考系统所提供的准确性基础上来。在实现溯源性目标过程中,永远以患者新鲜标本为实验对象,以方法学对比试验方法为验证手段。采用回归方程进行统计分析,斜率接近1,截距较小,说明"使用方法"对标本测定结果和溯源目标参考系统对标本检测结果非常接近,检测结果可靠。

 

6、抗凝剂的使用

    目前临床上常用的抗凝剂有EDTA..2K、肝素、草氨酸钠等,TBA和AFU不能用肝素抗凝剂,因为肝素会使TBA和AFU试剂发生混浊,导致吸光度假性偏高,从而使检测结果偏高。解决办法:①认真参阅试剂说明书;②作好与抽血人员之间的沟通和培训,使抽血人员知道什么项目用何种标本。

 

7、混成单一试剂的问题

    比如酶法肌酐试剂,第一步R1中的酶要消除样品中内源性肌酸的干扰,如果混成单一试剂,则会使检测结果偏高,消除法HDL、LDL也不能混成单一试剂,因为它们都要分别清除HDL和LDL以外的脂蛋白,从而达到检测的目的,如果混成单一试剂,则会使测定的HDL和LDL不准确。另外,有的试剂混成单一试剂后,稳定性和抗干扰能力也会明显下降。解决办法:①在仪器通道或试剂位允许的情况下尽量使用双试剂;②如一定要使用单一试剂,最好选择试剂厂家针对部份项目专门生产好的单一试剂。

 

8、试剂开瓶的问题

    随着全自动生化分析仪的普及,"开瓶稳定性"也随之受到了大家的重视,但是就目前有的试剂方法学来讲,还达不到人们所要求的试剂开瓶后在仪器内放很长时间不需要定标,比如ALP、TP、GSP等PH为碱性的试剂,开瓶后试剂会吸收空气中的二氧化碳,使试剂本身的PH值下降,如果长时间开瓶不定标或校准,会使检测结果发生偏离,在国外有的项目有明文规定,必须72小时之内定标,比如BUN。但是在国内的某些实验室为了方便,很长时间都不作校准,导致测定结果的不准确。解决办法:了解试剂的特性,及时对部份项目进行校准,2.对于每天标本量不多的医院,可按1~2天的用量取用试剂放入仪器。

 

9、不同批号试剂相混的问题

    目前将不同批号的试剂混合在一起使用的现象在检验中经常发生,当然这一方面是为了节省成本,另一方面为了方便。但是不管是什么品牌、什么试剂,由于不同批号的试剂生产时间不同,试剂中工具酶的活性会有差异,会发生水解的底物浓度随时间长短也会不同。因此混在一起使用而又不定标,可能会导致检测结果的不准确。还有如果有的试剂开瓶时间太长,空气中的灰尘或细菌会进入瓶中,由于有的试剂含有大量的蛋白质和盐,是细菌生长的最好条件,虽然有的试剂添加了防腐剂,但防腐剂的防腐也是有一定限度的,而且绝大多数厂家的试剂中是没有加防霉剂的。解决办法:①不同批号试剂建议不要混用,如果混用最好重新定标;②试剂瓶在仪器内使用时间不要过长,及时更换。③一般每个试剂瓶内由于试剂针不能吸完,或多或少都会留有几毫升的试剂,如果是同一批号可以将未开瓶的同一批号试剂往里倒,但如果不是同一批号的试剂时倒入后最好定标,最好的做法是将每个批号的剩余试剂留起来待一定数量后混在一起,然后重新定标后检测。